引物合成服务

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。 亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。 亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相邻的核苷酸通过3′→5′磷酸二酯键连接。

合成过程

第一步是将预先连接在固相载体上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5′-羟基的保护基团DMT，获得游离的5′-羟基。 第二步，合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3′端被活化，5′-羟基仍然被DMT保护，与溶液中游离的5′-羟基发生缩合反应。 第三步，带帽(capping)反应，缩合反应中可能有极少数5′-羟基没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在后续环节根据实验需要来选择纯化方式分离掉。 第四步，在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。

经过以上四个步骤，一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。 再以三氯乙酸脱去它的5′-羟基上的保护基团DMT，重复以上步骤，直到所有要求合成的碱基被接上去。 合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。 通过氨水高温处理，连接在CPG上的引物被切下来，通过OPC, PAGE等手段纯化引物，成品引物用C18浓缩,脱盐，沉淀。沉淀后的引物用水悬浮，测定OD260定量，根据定单要求分装。

服务特色和优势

严格的质量监控，高纯度的品质保证： 强耀生物拥有多种合成仪器，其中以BLP平台为主导，用于高通量的合成并搭配SpectraMax，全程监控合成的效率；此外我公司还有 ABI 3900和BioAutomation，可以大规模合成，专门用于一些特殊目的的合成。 除此之外，公司拥有多种型号的高效液相色谱仪，一次制备量可满足50nmol-50umol的合成级别，纯度可达到95%以上。

出货、发货速度快：

普通引物48小时内出货， 国内1-2天到货。 （DSL和OPC纯化引物（60base以下）发货时间一般1-2天；PAGE和HPLC纯化引物发货时间一般2-3天；修饰引物5-7发货时间一般为3-5天） *均为工作日 公司采用气相氨解仪进行氨解，采用高温高压氨气进行氨解，避开了普通氨水氨解，加快了氨解速度，减少了氨水氨解过程中微量物质的残留和污染，将对引物的损害降低到了最低程度；另外我们的氨解采用自动控制，减少了氨解过程中的偶然偏差。

多种纯化方式：

DSL纯化/ C18脱盐纯化； OPC纯化； PAGE纯化； HPLC纯化； 采用冻干技术，产品稳定性高： OD合成量高的引物，我们采用冻干技术，相比同行的真空加热干燥，可以很大程度减少对产品的损伤；冻干的引物在-20°C能够稳定长达一年，在4度能够稳定几个月。

合成多种修饰引物：

我公司可以提供多种高品质荧光修饰，包括双标记荧光探针，稀有碱基，硫代修饰，磷酸基团，各种荧光集团修饰，生物素，地高辛等。

强大的技术支持：

随时为您解答引物出现的任何问题。