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DNA测序服务

DNA测序

DNA测序(DNA sequencing,或译DNA定序)是指分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)与鸟嘌呤的(G)排列方式。快速的DNA测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。

在基础生物学研究中,和在众多的应用领域,如诊断,生物技术,法医生物学,生物系统学中,DNA序列知识已成为不可缺少的知识。具有现代的DNA测序技术的快速测序速度已经有助于达到测序完整的DNA序列,或多种类型的基因组测序和生命物种,包括人类基因组和其他许多动物,植物和微生物物种的完整DNA序列。

测序原理

化学修饰法测序原理

化学试剂处理末段DNA片段,造成碱基的特异性切割,产生一组具有各种不同长度的DNA链的反应混合物,经凝胶电泳分离。化学切割反应:包括碱基的修饰修饰的碱基从其糖环上转移出去在失去碱基的糖环处DNA断裂。

Sanger法测序的原理

就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

测序方法

强耀生物DNA测序 生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组寡核苷酸都有固定的起点,但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。 由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等,因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物,这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。 在可以区分长度仅差一个核苷酸的不同DNA分子的条件下,对各组寡核苷酸进行电泳分析,只要把几组寡核苷酸加样于测序凝胶中若干个相邻的泳道上,即可从凝胶的放射自影片上直接读出DNA上的核苷酸顺序。

测序服务类型

  • DNA常规测序
  • 复杂结构测序
  • 噬菌体测序
  • Primer Walking

对于常规的未知浓度的测序样品,您可以选择此项服务。

样品的类型包括质粒、PCR产物(已纯化PCR或无杂带的PCR原液)、菌体(平板克隆或甘油菌)、具有环状基因组的噬菌体(上清液或噬菌斑)。

由于二级结构或者其它内在因素的影响,复杂结构对于测序是巨大的挑战。常规的测序方案往往容易出现提前中断或者测序结果紊乱的现象。

以下几种序列特点的样品适合针对复杂结构的测序方案:
高GC含量:GC含量>60%的模板,或者局部高GC含量的模板
发夹结构:包含两个反向重复序列,两个重复序列之间间隔至少3个碱基
重复序列:2个或3个碱基的多个连续重复。
DNA发卡结构及RNAi 模板测序

RNA干扰(RNAi)是指双链RNA(dsRNA)介导的特异性抑制某相关基因表达的一种机制。它逐渐发展为一种研究基因功能的快速有效的新兴技术。

RNAi模板,由于其存在 “发卡结构”,给测序工作带来了很大挑战。在RNAi研究中采用的小发卡RNA(shRNA)通常无法测序成功,测序结果往往提前中断或者信号紊乱。强耀生物拥有专门针对shRNA模板的测序方案,测序结果得到客户的一致认可。

强耀生物的测序方案可以对环状基因组的噬菌体(噬菌体上清或者噬菌斑)直接测序。当难以获得足够量的测序用噬菌体DNA样品时,该操作为您省掉DNA制备的繁琐过程,并能获得高质量的测序结果。

本项服务包括:

  • 节约时间和成本-无需菌液培养和DNA制备
  • ABI3730xl DNA序列分析仪进行序列分析
  • Phred20有效长度大于600bp
  • 免费提供强耀生物通用引物
  • 您可以选择在线提交订单,强耀生物CLIMS系统将长期保存您的订单信息以及测序结果
  • 强耀生物的技术支持会针对项目中的问题及时与您沟通

强耀生物可以通过Primer Walking测序,帮助您获得未知克隆的序列信息,或者验证克隆序列的准确性。如果您提供参考序列,我们可以一次完成长片段克隆的全长测序。

本项服务包括:

  • 引物设计并合成
  • 根据序列图谱进行人工编辑
  • 序列拼接
  • 发送拼接序列结果

DNA测序服务优势

快速 - 专业的测序设备,保证大量样品的快速测序
复杂结构的佳测序方案
免费的通用引物
专业的技术支持

为了满足您更多的需求,强耀生物也为您提供引物合成服务基因合成服务蛋白表达、以及抗体定制服务。


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